Bakterilerde Gram Boyama Nedir?

Tanım

Bakterilerin tanımlanmasında kullanılan en önemli yöntemlerden biri olan gram boyama yöntemi, 1884 yılında Danimarkalı Doktor Hans Christian Gram tarafından geliştirilmiştir. Gram boyama, hala bakteri tanımlama ve sınıflandırma yapabilmenin temel taşıdır. Bu boyama yöntemi, bakterileri hücre duvarı yapısına göre iki gruba ayırır:

Gram-Pozitif Bakteriler (Hücre duvarının % 90’ını kalın peptidoglikan tabakası içerir.): Mor renge boyanır. Gram pozitif bakterilere örnek olarak Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis verilebilir.
Gram Negatif Bakteri (Hücre duvarının % 10’unu ince peptidoglikan tabakası içerir.): Kırmızı/pembe renge boyanır. Gram negatif bakterilere örnek olarak E. Coli, Pseudomonas aeruginosa, Etıterobacter aerogenes verilebilir.

Yöntem

Preparat hazırlanır. (bakteri kültüründen bir miktar, lam üzerine aktarılır, yayılır, kurutulur ve sabitlenir). Gram boyama için hazırlanacak preparatlarda kullanılacak kültürlerin genç (18-24 saatlik) olması gerekir. Daha yaşlı kültürlerle çalışılması durumunda yanlış sonuçlar alınabilir.
Preparatın üzerine kristal viyole boya çözeltisi eklenerek kaplanır ve 1 dakika beklenir.
Preparat bol distile su ile yıkanır.
Preparatın üzerine lugol çözeltisi eklenerek kaplanır ve 1 dakika beklenir.
Preparat distile suyla yıkanır.
Preparatın üzerine %95’lik etanol veya asit-alkol karışımı eklenerek 10-15 saniye beklenir.
Preparat tekrar distile su ile yıkanır.
Preparatın üzerine sulu fuksin veya safranin boya çözeltisi eklenerek kaplanır ve 30 saniye beklenir.
Preparat bol distile su ile yıkanır.
Preparat kurutulur. Mikroskopta incelenir. Mor renkte görülen mikroorganizmalar gram (+), pembe-kırmızı renkte görülenler ise gram (-) olarak değerlendirilir.

Kaynaklar:

Görsel Kaynak: https://www.istockphoto.com/tr/foto%C4%9Fraflar/mrsa?mediatype=photography&page=4&phrase=mrsa&sort=mostpopular

Editör: Molekülce Kaynak